Inom kemi är utspädning processen för att minska koncentrationen av ett ämne i en lösning. Kedjespädning är upprepad utspädning av en lösning för att snabbt öka utspädningsfaktorn. Denna procedur utförs vanligtvis i experiment som kräver mycket utspädda lösningar med hög noggrannhet. Exempelvis experiment med koncentrationskurvor i logaritmisk skala eller experiment för att bestämma densiteten hos bakterier. Kedjespädningar används ofta i vetenskapliga experiment som biokemi, mikrobiologi, farmakologi och fysik.
Steg
Metod 1 av 2: Utföra grundspädning
Steg 1. Bestäm lämplig utspädningslösning
Det är mycket viktigt att bestämma vätskan som ska användas för utspädning. Många lösningar är lösliga i destillerat vatten, men så är inte alltid fallet. Om du spädar bakterier eller andra celler, gör det på ett odlingsmedium. Vätskan du väljer kommer att användas för alla kedjespädningar.
Om du är osäker på vilket spädningsmedel som ska användas, sök hjälp eller titta på nätet. Leta efter exempel från andra som har gjort liknande kedjespädningar
Steg 2. Förbered ett antal provrör som innehåller 9 ml utspädningsmedel
Provrör används för tomma spädningar. Lägg först det outspädda provet i det första röret, gör sedan spädningarna i följd till nästa rör.
- Märk alla rör som används innan utspädningen startar så att du inte blir förvirrad när experimentet körs.
- Varje rör fylls med 10 utspädningar, utgående från röret vars ämne inte har spädts ut. Spädningen i det första röret är 1:10, följt av 1: 100 i det andra röret, 1: 1000 för det tredje röret och så vidare. Bestäm mängden utspädning som måste utföras i förväg, så att du inte slösar ut spädningslösningen.
Steg 3. Förbered ett provrör som innehåller minst 2 ml outspädd lösning
Den minsta mängd lösning som ska spädas som krävs för att utföra denna kedjespädning är 1 ml. Om du bara använder 1 ml finns det ingen outspädd lösning kvar. Märk BLM för outspädda lösningar.
Blanda lösningen noggrant innan spädning påbörjas
Steg 4. Utför den första utspädningen
Ta 1 ml av den outspädda lösningen från BLM -provröret med en pipett och lägg den i ett provrör märkt 1:10 innehållande 9 ml utspädningsmedel och blanda sedan noggrant. Det finns nu 1 ml av den outspädda lösningen i 9 ml av utspädningsmedlet. Således har lösningen spädts med en utspädningsfaktor på 10.
Steg 5. Utför den andra utspädningen
För den andra utspädningen, ta 1 ml av lösningen från 1:10 -röret och lägg sedan det i 1: 100 -röret som också innehåller 9 ml av utspädningsmedlet. Se till att lösningen i 1:10 -röret är helt blandad innan du lägger den till nästa rör. Återigen, se till att utspädningen i 1: 100 -röret är helt blandad. Lösningen från 1:10-röret späddes 10-faldigt i 1: 100-röret.
Steg 6. Fortsätt denna procedur för att utföra längre kedjespädningar
Denna process kan upprepas så många gånger som behövs för att erhålla den önskade lösningskoncentrationen. I experiment med koncentrationskurvor kan du utföra kedjespädningar för att producera ett antal lösningar med utspädningar av 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000.
Metod 2 av 2: Beräkning av utspädningsfaktorn och slutkoncentrationen
Steg 1. Beräkna förhållandet mellan den sista utspädningen i kedjespädningen
Det totala utspädningsförhållandet kan bestämmas genom att multiplicera utspädningsfaktorn från varje steg till det sista steget. Den matematiska illustrationen är med formeln Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , Dt är den totala utspädningsfaktorn och D är utspädningsförhållandet.
- Låt oss till exempel säga att du gör en spädning 1:10 4 gånger. Anslut utspädningsfaktorn till formeln: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10 000
- Utspädningsfaktorn i det fjärde röret i denna kedjespädning är 1: 10 000. Koncentrationen av ämnet efter utspädningen är 10 000 gånger lägre än innan det späddes.
Steg 2. Bestäm koncentrationen av lösningen efter utspädning
För att bestämma den slutliga koncentrationen av en lösning efter en kedjespädning måste du veta dess initiala koncentration. Formeln är Cslutet = Cbörjan/D, Cslutet är den slutliga koncentrationen av den utspädda lösningen, Cbörjan är den ursprungliga koncentrationen av den ursprungliga lösningen, och D är det förutbestämda utspädningsförhållandet.
- Till exempel: Om du börjar med en celllösning vars koncentration är 1 000 000 celler per ml och utspädningsförhållandet är 1 000, vad är slutkoncentrationen av det utspädda provet?
-
Med hjälp av formeln:
- Cslutet = Cbörjan/D
- Cslutet = 1.000.000/1.000
- Cslutet = 1000 celler per ml.
Steg 3. Se till att alla enheter är desamma
När du gör någon beräkning, se till att enheterna alltid är desamma i slutet av beräkningen. Om den initiala enheten är celler per ml, se till att enheterna förblir desamma i slutet av beräkningen. Om den ursprungliga koncentrationen är delar per miljon (bpd), måste den slutliga koncentrationen också vara i bpj -enheter.
